A clonagem e molecular … epítopo

A clonagem e molecular … epítopo

A clonagem e molecular ... epítopo

1 Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular, e 2 Departamento de Pediatria da Universidade de Arkansas Pará Ciências Médicas, Instituto de Arkansas Children Research Hospital, Little Rock, Arkansas 72205, EUA 3 Departamento de Pediatria, Mount Sinai Medical School, New York, New York 10029, EUA

Endereço para correspondência: Gary A. Bannon, Universidade de Arkansas parágrafo Ciências Médicas, entalhe 516, 4301 W. Markham, Little Rock, Arkansas 72205, EUA. Telefone: (501) 686-5787; Fax: (501) 686-8169; E-mail: ude.smau.egnahcxe@ayragnonnaB

Recebeu 1998 28 de setembro; Aceito 1999 01 de janeiro.

Copyright 1999, American Society for Clinical Investigation

Abstrato

Introdução

Métodos

Pacientes.

O Isolamento e uma Análise da Sequência de aminoácido de amendoim alergénio Ara h 3.

Identificação de Ara h 3 clones de ADNc.

A amplificação de cDNA de glicinina Termina.

A amplificação POR PCR da Sequência de ARNm de Ara h 3.

sequenciamento de DNA e Análise.

A sequenciação foi realizada de according com OS Métodos de Sanger et ai. (17) utilizando oligonucleótidos iniciadores direccionados parágrafo Diferentes Regiões que clonar e o ADN femtomole Ciclo Sistema de sequenciação (Promega Corp.). Uma Análise da Sequência foi realizada na Universidade de Arkansas parágrafo Computador Vax de Ciências Médicas usando o Pacote de software de Análise de DNA Wisconsin (18).

Expressão bacteriana e Purificação de Ara h 3 recombinante.

SDS-PAGE, Western blot, Ensaio de Ligação e um IgE.

A peptídica Síntese.

Resultados

Um e Sequência molecular clonagem fazer Ara h 3 cDNA.

Sequência de nucleótidos de hum clone de ADNc h 3 Ara. A Sequência de nucleótidos Está na Linha Segunda. A Primeira Linha representação de uma Sequência de Aminoacidos derivada. Aminoacidos em Caixas correspondem à Sequência de Aminoacidos determinada a Partir do NH2 -o terminal da proteína Ara h 3. .

Expressão, antigenicidade, e um Purificação fazer recombinante Ara h 3.

Regiões situadas Ao Longo da proteína Ara h 3 Múltiplos de Ligação à IgE.

Ara h 3 epitopos de Ligação à IgE

A imunodominância e Caracterização do Ara h 3 epitopos.

Como Mutações em Resíduos Específicos Eliminar a Ligação à IgE.

Aminoacidos Críticos parágrafo Ligação à IgE

Discussão

AGRADECIMENTOS

Referências

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Artigos de The Journal of Clinical Investigation São fornecidas here cortesia de American Society for Clinical Investigation

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